Atrofimizda oddiydek tuyuladigan, ammo aslida bizga jimgina hissa qo'shadigan ko'plab taniqli bo'lmagan qahramonlar bor. Proteinaza K molekulyar diagnostika sanoatidagi "tan olinmagan qahramon" hisoblanadi, garchi sanoatdagi "katta va kuchli" proteinaza K bilan solishtirganda, biz uning ahamiyatini uzoq vaqtdan beri e'tibordan chetda qoldirib kelmoqdamiz. Yangi toj epidemiyasi boshlanishi bilan proteinaza K ga talab keskin oshdi va uyda va chet elda taklif iste'moldan ancha orqada qoldi va hamma to'satdan proteinaza K ning juda muhimligini angladi.
Proteinaza K ning ishlatilishi nimada?
Proteinaza K proteolitik ferment faolligiga ega serin proteaza bo'lib, keng muhitlarda (pH (4-12,5), yuqori tuzli bufer, 70°C yuqori harorat va boshqalar) faollikni saqlab turishi mumkin. Bundan tashqari, proteinaza K ning faolligi SDS, karbamid, EDTA, guanidin gidroxlorid, guanidin izotiyosiyanat va boshqalar tomonidan inhibe qilinmaydi va ma'lum miqdorda yuvish vositasi ham proteinaza K ning faolligini oshirishi mumkin. Tibbiy davolashda (virus va mikrobial dezinfeksiya), oziq-ovqatda (go'shtni yumshoq qilish), charmda (sochlarni yumshatish), vinochilikda (spirtli tozalash), aminokislotalarni tayyorlashda (parchalangan patlar), nuklein kislotalarni ekstraktsiya qilishda, joyida gibridizatsiya qilishda va boshqalarda proteinaza K qo'llanilishi mavjud. Eng ko'p ishlatiladigan qo'llanilish nuklein kislotalarni ekstraktsiya qilishdir.
Proteinaza K namunadagi barcha turdagi oqsillarni, jumladan, nuklein kislotalarga mahkam bog'langan gistonlarni fermentatsiyalashi mumkin, shunda nuklein kislotalar namunadan ajralib, ekstraktga chiqarilishi mumkin, bu esa ekstraktsiya va tozalashning keyingi bosqichini osonlashtiradi. Virusli nuklein kislotani aniqlashda proteinaza K virus namunalarini olish eritmasidagi muhim tarkibiy qismlardan biridir. Proteinaza K virusning qobiq oqsilini yorib, inaktivatsiya qilishi mumkin, bu esa tashish va aniqlash bosqichida xavfsizroqdir; bundan tashqari, proteinaza K RNazani ham parchalashi mumkin, bu virusli RNKning parchalanishini oldini oladi va nuklein kislotani aniqlashni osonlashtiradi.
Proteinaz K ning bir kechada shuhrati
Ilmiy tadqiqotlar sohasida bo'ladimi yoki IVD sohasida bo'ladimi, nuklein kislotasini ekstraktsiya qilish eng asosiy tajriba hisoblanadi, shuning uchun proteinaza K har doim juda muhim mavjudlik bo'lib kelgan. Biroq, o'tmishda proteinaza K uning rolidan ko'ra kamroq ma'lum edi. Buning katta qismi proteinaza K ning talab va taklif munosabatlari juda barqaror bo'lganligi bilan bog'liq edi. Proteinaza K ning yetkazib berilishi muammo bo'ladi deb kam odam o'ylaydi.
Yangi toj epidemiyasi boshlanishi bilan nuklein kislotasini sinashga talab keskin oshdi. 2020-yil iyun oyi oxiriga kelib, Xitoy qariyb 90 million yangi toj sinovlarini yakunladi va bu raqam global miqyosda yanada xavotirli. Nuklein kislotasini ekstraksiya qilish tajribalarida proteinaza K ning ishchi konsentratsiyasi taxminan 50-200 mkg/ml ni tashkil qiladi. Odatda, nuklein kislota namunasini olish uchun taxminan 100 mkg proteinaza K kerak bo'ladi. Amalda, nuklein kislotasini ekstraksiya qilish samaradorligini oshirish uchun ko'pincha proteinaza K ko'proq miqdorda ishlatiladi. Yangi koronavirusning nuklein kislotasini aniqlash proteinaza K ga katta miqdorda talabni keltirib chiqardi. Proteinaza K ning asl talab va taklif balansi tezda buzildi va proteinaza K bir kechada epidemiyaning oldini olishda muhim materialga aylandi.
Proteinaza K ishlab chiqarishdagi qiyinchiliklar
Epidemiya rivojlanishi bilan proteinaza K ning muhim qiymati odamlar tomonidan qadrlangan bo'lsa-da, proteinaza K ning haddan tashqari past kalitliligi tufayli proteinaza K ishlab chiqarishda kam sonli mahalliy kompaniyalar ishtirok etgani xijolatli. Odamlar proteinaza K ishlab chiqarishni yo'lga qo'ymoqchi bo'lganlarida Ishlab chiqarish jarayonida proteinaza K juda o'ziga xos oqsil ekanligi aniqlandi. Qisqa vaqt ichida proteinaza K ning ishlab chiqarish quvvatini kengaytirish juda qiyin.
Proteinaza K ning keng ko'lamli ishlab chiqarilishi quyidagi qiyinchiliklarga duch keladi
1. Kam ifoda
Proteinaza K ko'pgina oqsillarni nospesifik tarzda parchalashi va ekspressiya qiluvchi xost hujayraga jiddiy toksiklik keltirib chiqarishi mumkin. Shuning uchun, proteinaza K ning ekspressiya darajasi odatda juda past. Proteinaza K ni yuqori darajada ifodalaydigan ekspressiya tizimlari va shtammlarini skrining qilish odatda uzoqroq siklni talab qiladi.
2. Pigmentlar va nuklein kislotalarning qoldiqlari
Keng ko'lamli fermentatsiya ko'p miqdorda pigment va nuklein kislota qoldiqlarini kiritadi. Bu aralashmalarni oddiy tozalash jarayoni bilan olib tashlash qiyin, murakkab tozalash esa xarajatlarni oshiradi va tiklanish tezligini pasaytiradi.
3. Beqarorlik
Proteinaza K yetarlicha barqaror emas, u o'zini fermentatsiya qila oladi va uni himoya vositasiz uzoq vaqt davomida 37°C da barqaror saqlash qiyin.
4. Cho'kish oson
Proteinaz K ning muzlatib quritilgan kukunini tayyorlashda, muzlatib quritilgan kukun tarkibidagi proteinaz K ning qattiq miqdori katta bo'lishini ta'minlash uchun yuqori konsentratsiyada muzlatib quritilgan himoya vositasini qo'shish kerak, ammo proteinaz K ning konsentratsiyasi 20 mg/ml va undan yuqori bo'lganda, bu osonlikcha agregatsiyalanadi, bu esa yuqori qattiq tarkibli proteinaz K ni muzlatib quritishda katta qiyinchiliklarga olib keladi.
5. Katta investitsiya
Proteinaza K kuchli proteaza faolligiga ega va laboratoriyada boshqa proteazalarni gidrolizlashi mumkin. Shuning uchun, proteinaza K tadqiqot va ishlanmalar hamda ishlab chiqarish uchun ixtisoslashgan ishlab chiqarish maydonlari, uskunalar va xodimlarni talab qiladi.
XD BIOCHEM proteinaza K eritmasi
XD BIOCHEM yetuk oqsil ifodalash va tozalash platformasiga ega va rekombinant oqsillarni ifodalash va tozalash hamda ishlab chiqarish jarayonlarini optimallashtirish bo'yicha boy tajribaga ega. Tadqiqot va ishlanmalar guruhining tezkor shakllanishi orqali proteinaza K ning keng ko'lamli ishlab chiqarish jarayoni yengib o'tildi. Muzlatilgan quritilgan kukunning oylik ishlab chiqarish hajmi 30 kg dan ortiq. Mahsulot barqaror ishlashga, yuqori fermentga xos faollikka va xost sitoxrom va nuklein kislota qoldiqlariga ega emas. XD BIOCHEM bilan bog'lanishga xush kelibsiz. Sinov paketini oling (Elektron pochta:sales@xdbiochem.comTel: +86 513 81163739).
XD BIOCHEMning texnik yechimlari quyidagilarni o'z ichiga oladi
Ko'p nusxali plazmid integratsiyasidan foydalanib, 8 g/L ifoda darajasiga ega yuqori ifodali shtammlar tanlanadi, bu esa proteinaza K ning past ifoda darajasi muammosini yengib chiqadi.
Ko'p bosqichli tozalash jarayonini o'rnatish orqali proteinaza K ning sitoxrom va nuklein kislota qoldiqlari standart qiymatdan past darajada muvaffaqiyatli olib tashlandi.
Himoya bufer formulalarini yuqori o'tkazuvchanlik bilan skrining qilish orqali proteinaza K ni 37°C da barqaror saqlay oladigan bufer tanlandi.
Skrining buferlari proteinaza K ning yuqori konsentratsiyalarda osongina agregatsiyalanishi va cho'kishi muammosini yengib chiqadi va proteinaza K ning yuqori qattiq tarkibli muzlatib quritish uchun asos yaratadi.
XD BIOCHEM proteinaz K namunasi
XD BIOCHEM proteinaza K barqarorlik testi: xona haroratida 80 kundan keyin faollikda sezilarli o'zgarish bo'lmaydi
XD BIOCHEM proteinaza K barqarorlik testi: xona haroratida 80 kundan keyin faollikda sezilarli o'zgarish bo'lmaydi.
XD BIOCHEM proteinaza K va raqobatdosh mahsulotlarning nuklein kislota ekstraksiya effektini taqqoslash. Nuklein kislota ekstraksiya jarayonida mos ravishda XD BIOCHEM va raqobatbardosh proteinaza K ishlatiladi. XD BIOCHEM proteinaza K ning ekstraksiya samaradorligi yuqoriroq va maqsadli genning Ct qiymati pastroq.
Nashr vaqti: 2021-yil 31-dekabr