Ditiotreitol (DTT) keng tarqalgan ishlatiladigan qaytaruvchi vosita bo'lib, yangi yashil qo'shimcha sifatida ham tanilgan. Bu ikkita merkaptan guruhiga (-SH) ega bo'lgan kichik molekulyar organik birikma. Qaytaruvchi xususiyatlari va barqarorligi tufayli DTT biokimyo va molekulyar biologiya tajribalarida keng qo'llaniladi.
DTT ning asosiy roli oqsillar va boshqa biomolekulalardagi disulfid bog'lanishlarini kamaytirishdir. Disulfid bog'lanishi oqsilning katlanishi va barqarorligining muhim qismidir, ammo ma'lum eksperimental sharoitlarda, masalan, qaytariladigan SDS-PAGE tahlili, oqsil rekombinatsiyasi va katlanishida, oqsilning fazoviy tuzilishini ochish uchun disulfid bog'lanishini ikkita tiol guruhiga kamaytirish kerak. DTT disulfid bog'lanishlari bilan reaksiyaga kirishib, ularni merkaptan guruhlariga kamaytirishi mumkin, shu bilan oqsilning fazoviy tuzilishini ochadi va uni tahlil qilish va boshqarishni osonlashtiradi.
DTT ferment faolligi va barqarorligini himoya qilish uchun ham ishlatilishi mumkin. Ba'zi ferment katalizlangan reaksiyalarda ferment faolligi oksidlovchi tomonidan pasayishi mumkin. DTT oksidlovchilar bilan reaksiyaga kirishib, ularni zararsiz moddalarga aylantirishi va shu bilan ferment faolligi va barqarorligini himoya qilishi mumkin.
β-merkaptoetanol (β-ME) kabi an'anaviy qaytaruvchi moddalar bilan solishtirganda, DTT xavfsizroq va barqarorroq qaytaruvchi vosita hisoblanadi. U nafaqat suvli eritmada barqaror, balki yuqori harorat va kislota-asos sharoitida ham qaytaruvchi xususiyatlarini saqlab qoladi.
DTT dan foydalanish nisbatan oddiy. Umuman olganda, DTT tegishli buferda eritiladi va keyin tajriba tizimiga qo'shiladi. DTT ning optimal konsentratsiyasi ma'lum bir tajribaga muvofiq aniqlanishi kerak va odatda 0,1-1 mM oralig'ida qo'llaniladi. Pastroq konsentratsiyalar hujayra o'sishiga salbiy ta'sirni kamaytirishi va maqsadli oqsillarning haddan tashqari ifodalanishi tufayli sitotoksiklikni kamaytirishi mumkin. Yuqori konsentratsiyalar hujayra metabolik yukini oshirib, hujayra o'sishi va ifoda samaradorligiga ta'sir qilishi mumkin.
Optimal konsentratsiyani aniqlash usuli turli konsentratsiyalarda IPTG induksiya sinovlarini o'tkazish orqali maqsadli oqsilning ifoda darajasini baholash bo'lishi mumkin. Kichik miqyosli madaniyat sinovlari turli xil IPTG konsentratsiyalari (masalan, 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM va boshqalar) yordamida amalga oshirilishi mumkin va turli konsentratsiyalarda ifoda effekti maqsadli oqsilning ifoda darajasini aniqlash orqali baholanishi mumkin (masalan, Western blot yoki floresan detektori). Tajriba natijalariga ko'ra, eng yaxshi ifoda effektiga ega konsentratsiya optimal konsentratsiya sifatida tanlandi.
Bundan tashqari, shunga o'xshash eksperimental sharoitlarda keng tarqalgan IPTG konsentratsiya diapazonini tushunish uchun tegishli adabiyotlarga yoki boshqa laboratoriyalarning tajribasiga murojaat qilishingiz va keyin eksperimental ehtiyojlarga muvofiq optimallashtirishingiz va sozlashingiz mumkin.
Shuni ta'kidlash kerakki, optimal konsentratsiya turli ifoda tizimlariga, maqsadli oqsillarga va eksperimental sharoitlarga qarab farq qilishi mumkin, shuning uchun har bir holatni alohida-alohida optimallashtirish eng yaxshisidir.
Xulosa qilib aytganda, DTT oqsillar va boshqa biomolekulalardagi disulfid bog'lanishlarini kamaytirish va ferment faolligi va barqarorligini himoya qilish uchun ishlatilishi mumkin bo'lgan keng tarqalgan qaytaruvchi vositadir. U biokimyo va molekulyar biologiya tajribalarida keng qo'llanilgan.
Nashr vaqti: 2023-yil 28-sentabr