Ditiotreitol (DTT) yangi yashil qo'shimcha sifatida ham tanilgan tez-tez ishlatiladigan qaytaruvchi vositadir.Bu ikki merkaptan guruhi (-SH) bo'lgan kichik molekulyar organik birikma.DTT o'zining kamaytiruvchi xususiyatlari va barqarorligi tufayli biokimyo va molekulyar biologiya tajribalarida keng qo'llaniladi.
DTT ning asosiy roli oqsillar va boshqa biomolekulalardagi disulfid aloqalarini kamaytirishdir.Disulfid aloqasi oqsil katlamasi va barqarorligining muhim qismidir, ammo ma'lum eksperimental sharoitlarda, masalan, qaytariladigan SDS-PAGE tahlili, oqsilning rekombinatsiyasi va katlamasi kabi, disulfid bog'lanishini ikki tiol guruhiga kamaytirish kerak. oqsil.DTT disulfid aloqalari bilan reaksiyaga kirishib, ularni merkaptan guruhlariga qisqartirishi mumkin, shu bilan oqsilning fazoviy tuzilishini ochib, tahlil qilish va boshqarishni osonlashtiradi.
DTT ferment faolligi va barqarorligini himoya qilish uchun ham ishlatilishi mumkin.Ayrim ferment katalizlangan reaksiyalarda ferment faolligi oksidlovchi tomonidan kamayishi mumkin.DTT oksidlovchilar bilan reaksiyaga kirishib, ularni zararsiz moddalarga aylantira oladi va shu bilan fermentning faolligi va barqarorligini himoya qiladi.
B-merkaptoetanol (b-ME) kabi an'anaviy qaytaruvchi vositalar bilan solishtirganda, DTT xavfsizroq va barqarorroq qaytaruvchi vosita hisoblanadi.U nafaqat suvli eritmada barqaror, balki yuqori harorat va kislota-ishqor sharoitida ham o'zining qaytaruvchi xususiyatlarini saqlab qoladi.
DTT dan foydalanish nisbatan oddiy.Umuman olganda, DTT tegishli buferda eritiladi va keyin eksperimental tizimga qo'shiladi.DTT ning optimal kontsentratsiyasi maxsus tajribaga muvofiq aniqlanishi kerak va odatda 0,1-1 mM oralig'ida qo'llaniladi.Pastroq konsentratsiyalar hujayra o'sishiga salbiy ta'sirni kamaytirishi va maqsadli oqsillarning haddan tashqari ko'payishi tufayli sitotoksiklikni kamaytirishi mumkin.Yuqori konsentratsiyalar hujayra o'sishi va ifoda samaradorligiga ta'sir qiluvchi ortiqcha hujayra metabolik yukini keltirib chiqarishi mumkin.
Optimal kontsentratsiyani aniqlash usuli turli konsentratsiyalarda IPTG induksion testlarini o'tkazish orqali maqsadli oqsilning ifoda darajasini baholash bo'lishi mumkin.Kichik miqyosdagi kultura testlari IPTG kontsentratsiyasining diapazoni (masalan, 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM va boshqalar) yordamida amalga oshirilishi mumkin va turli konsentratsiyalarda ifoda ta'siri maqsadli oqsilning ifoda darajasini aniqlash orqali baholanishi mumkin (masalan, G'arbiy blot yoki floresansni aniqlash).Eksperimental natijalarga ko'ra, eng yaxshi ifoda ta'siriga ega bo'lgan konsentratsiya optimal konsentratsiya sifatida tanlangan.
Bunga qo'shimcha ravishda, shunga o'xshash eksperimental sharoitlarda keng tarqalgan ishlatiladigan IPTG kontsentratsiyasi oralig'ini tushunish uchun tegishli adabiyotga yoki boshqa laboratoriyalarning tajribasiga murojaat qilishingiz mumkin, keyin esa eksperimental ehtiyojlarga muvofiq optimallashtirish va sozlashingiz mumkin.
Shuni ta'kidlash kerakki, optimal konsentratsiya turli xil ifoda tizimlari, maqsadli oqsillar va eksperimental sharoitlarga qarab farq qilishi mumkin, shuning uchun har bir holatda optimallashtirish yaxshidir.
Xulosa qilib aytganda, DTT oqsillar va boshqa biomolekulalardagi disulfid aloqalarini kamaytirish va ferment faolligi va barqarorligini himoya qilish uchun ishlatilishi mumkin bo'lgan tez-tez ishlatiladigan qaytaruvchi vositadir.U biokimyo va molekulyar biologiya tajribalarida keng qo'llanilgan.
Xabar vaqti: 28-sentyabr, 2023-yil