4-Nitrofenil beta-D-galaktopiranozid CAS:200422-18-0

Ta'siri: ONPG - bu β-galaktozidaza fermentining mavjudligi va faolligini aniqlash uchun maxsus ishlatiladigan substrat. β-galaktozidaza fermenti mavjud va faol bo'lganda, u ONPGni ikkita mahsulotga ajratadi: o-nitrofenol va galaktoza hosilasi. O-nitrofenolning ajralib chiqishi sariq rang o'zgarishiga olib keladi, uni spektrofotometr yordamida o'lchash mumkin.

Qo'llanilishi: ONPG molekulyar biologiya va biokimyo tadqiqotlarida bir nechta qo'llanmalarga ega:

β-galaktozidaza faolligini aniqlash: ONPG odatda β-galaktozidaza fermentining faolligini o'lchash va miqdorini aniqlash uchun ishlatiladi. Ferment faolligiga to'g'ridan-to'g'ri proportsional bo'lgan o-nitrofenol hosil bo'lish tezligini spektrofotometriya yordamida o'lchash mumkin.

Gen ekspressiyasi va regulyatsiyasi: ONPG ko'pincha gen ekspressiyasi va regulyatsiyasi tadqiqotlari bilan bog'liq tajribalarda qo'llaniladi. U tez-tez ishlatiladigan lacZ termoyadroviy tizimi kabi sintez oqsili tahlillarida ma'lum promotorlar nazorati ostida genlarning ekspressiyasini o'rganish uchun ishlatiladi. ONPG yordamida o'lchangan beta-galaktozidaza faolligi gen ekspressiyasi darajasi haqida ma'lumot beradi.

β-galaktozidaza faolligini skrining qilish: ONPG rekombinant DNK texnologiyasida β-galaktozidazani kodlaydigan LacZ genining mavjudligi va funksionalligini aniqlash uchun kolorimetrik skrining usuli sifatida ishlatilishi mumkin. Ushbu skrining usuli qiziqish genini o'z ichiga olgan klonlarni aniqlashga yordam beradi.

Ferment kinetikasini o'rganish: ONPG shuningdek, β-galaktozidaza fermentining kinetikasini o'rganishda ham foydalidir. Turli substrat konsentratsiyalarida ferment-substrat reaksiya tezligini o'lchash orqali Michaelis-Menten konstantalari (Km) va maksimal reaksiya tezligi (Vmax) kabi kinetik parametrlarni aniqlash mumkin.