Optimal konsentratsiyani qanday aniqlash mumkin?
Induktor IPTG (izopropil-beta-d-tiogalaktozid) uchun konsentratsiya qanchalik yuqori bo'lsa, shuncha yaxshi bo'ladi.Optimal kontsentratsiya maxsus eksperimental sharoitga va kerakli indüksiyon effektiga bog'liq.
Odatda, IPTG kontsentratsiyasi 0,1-1 mM oralig'ida qo'llaniladi.Pastroq konsentratsiyalar hujayra o'sishiga salbiy ta'sirni kamaytirishi va maqsadli oqsillarning haddan tashqari ko'payishi tufayli sitotoksiklikni kamaytirishi mumkin.Yuqori konsentratsiyalar hujayra o'sishi va ifoda samaradorligiga ta'sir qiluvchi ortiqcha hujayra metabolik yukini keltirib chiqarishi mumkin.
Optimal kontsentratsiyani aniqlash usuli turli konsentratsiyalarda IPTG induksion testlarini o'tkazish orqali maqsadli oqsilning ifoda darajasini baholash bo'lishi mumkin.Kichik miqyosdagi kultura testlari IPTG kontsentratsiyasining diapazoni (masalan, 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM va boshqalar) yordamida amalga oshirilishi mumkin va turli konsentratsiyalarda ifoda ta'siri maqsadli oqsilning ifoda darajasini aniqlash orqali baholanishi mumkin (masalan, G'arbiy blot yoki floresansni aniqlash).Eksperimental natijalarga ko'ra, eng yaxshi ifoda ta'siriga ega bo'lgan konsentratsiya optimal konsentratsiya sifatida tanlangan.
Bunga qo'shimcha ravishda, shunga o'xshash eksperimental sharoitlarda keng tarqalgan ishlatiladigan IPTG kontsentratsiyasi oralig'ini tushunish uchun tegishli adabiyotga yoki boshqa laboratoriyalarning tajribasiga murojaat qilishingiz mumkin, keyin esa eksperimental ehtiyojlarga muvofiq optimallashtirish va sozlashingiz mumkin.
Shuni ta'kidlash kerakki, optimal konsentratsiya turli xil ifoda tizimlari, maqsadli oqsillar va eksperimental sharoitlarga qarab farq qilishi mumkin, shuning uchun har bir holatda optimallashtirish yaxshidir.
Xabar vaqti: 28-sentyabr, 2023-yil